Материалы к защите диссертации: Наволокин Никита Александрович

Результаты публичной защиты  (от 29.09.2020 г. протокол № 7) в диссертационном совете Д 208.008.01, созданном на базе ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Наволокина Никиты Александровича на тему «Патоморфоз и механизмы гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов» по специальностям 14.03.02 – патологическая анатомия и 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология.

В соответствии с рекомендациями Минобрнауки России № МН-3/3452 от 17.07.2020  «О проведении заседаний диссертационных советов в дистанционном режиме»  и по письменному распоряжению ректора,  в связи с эпидемиологической обстановкой защита  диссертации Наволокина Н.А.  на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальностям 14.03.02 – патологическая анатомия и 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология проводилась  в удаленном интерактивном режиме.

Постановили: считать кандидатскую диссертацию Наволокина Н.А. соответствующей критериям  п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степеней», утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.09.2013 г. № 842 (в редакции постановления Правительства РФ № 335 от 21.04.2016 г., № 1024  от 28.08.2017 г. и № 1168 от 01.10.2018 г.), предъявляемым к диссертациям  на соискание ученой степени кандидата наук и присудить Наволокину Н.А., учёную степень кандидата медицинских наук. Решение принято открытым голосованием: за – 19, против –  0, не участвовавших в голосовании – 0.

 Список членов диссертационного совета Д 208.008.01, присутствовавших на заседании совета 29.09.2020 г.: д.м.н., проф. Смирнов А.В. (председатель) 03.03.04; д.м.н., проф. Рогова Л.Н. (зам.председателя) 03.03.04; д.м.н. Григорьева Н.В. (ученый секретарь) 14.03.02; д.м.н., проф. Александрова Л.И. 14.03.01; д.м.н. проф. Боташева В.С. 14.03.02; д.м.н. Гуров Д.Ю. 03.03.04, д.м.н.. проф. Ермилов В.В. 14.03.02; д.м.н., проф. Замараев В.С. 03.03.04; д.м.н., доц. Калашникова С.А. 14.03.02; д.м.н., проф. Коробкеев А.А. 14.03.01; д.м.н., проф. Краюшкин А.И. 14.03.01; д.м.н., проф. Лютая Е.Д. 14.03.01; д.м.н., профессор Маланин Д.А. 14.03.02, д.м.н., проф. Перепелкин А.И. 14.03.01; д.м.н., д.м.н., доц. Поройский С.В. 14.03.02; д.м.н., проф. Самусев Р.П. 14.03.01; д.м.н., доц. Снигур Г.Л. 03.03.04; д.м.н., проф.  Хлопонин П.А. 03.03.04, д.м.н., проф. Чаплыгина Е.В. 14.03.01.

Председатель диссертационного совета, д.м.н., профессор Смирнов А.В.
Ученый секретарь диссертационного совета, д.м.н. Григорьева Н.В.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА Д 208.008.01, СОЗДАННОГО НА БАЗЕ ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО БЮДЖЕТНОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ,

ПО ДИССЕРТАЦИИ
НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА НАУК

аттестационное дело № 

решение диссертационного совета от 29.09.2020 № 7

О присуждении Наволокину Никите Александровичу, гражданину Российской Федерации, ученой степени кандидата медицинских наук.

Диссертация «Патоморфоз и механизмы гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов» по специальностям 14.03.02 - патологическая анатомия, 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология принята к защите 25.02.2020 г., протокол № 3 диссертационным советом Д 208.008.01, созданным на базе федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования (ФГБОУ ВО) «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1, совет утвержден приказом № 105/нк от 11.04.2012 г. на срок действия Номенклатуры специальностей научных сотрудников).

Соискатель Наволокин Никита Александрович, 1990 года рождения.

В 2013 году соискатель окончил ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Минздрава России по специальности «Лечебное дело».

В 2016 г. соискатель окончил аспирантуру по специальности «Патологическая анатомия» на базе кафедры патологической анатомии ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Минздрава России,

работает ассистентом кафедры патологической анатомии в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

 Диссертация выполнена на кафедре патологической анатомии, кафедре общей биологии, фармакогнозии и ботаники и лаборатории клеточных технологий НИИ Фундаментальной и клинической уронефрологии ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Минздрава России.

Научные руководители – доктор медицинских наук, профессор Маслякова Галина Никифоровна, ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Минздрава России, кафедра патологической анатомии, заведующий  кафедрой;

доктор биологических наук, профессор Полуконова Наталья Владимировна, ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Минздрава России, кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники, профессор кафедры.

Официальные оппоненты:

Доросевич Александр Евдокимович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Смоленский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра патологической анатомии, заведующий кафедрой;

Полякова Валентина Сергеевна  - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра патологической анатомии, заведующий кафедрой дали положительные отзывы на диссертацию.

Ведущая организация федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Самара, в своем положительном отзыве, подписанном Федориной Татьяной Александровной - доктором медицинских наук, профессором, кафедра общей и клинической патологии, патологической анатомии, патологической физиологии, заведующий кафедрой и Суворовой Галиной Николаевной - доктором биологических наук, заслуженным работником высшей школы РФ, профессором, кафедра гистологии и эмбриологии, заведующий кафедрой, указала, что диссертация Наволокина Никиты Александровича  «Патоморфоз и механизмы гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов», представленная на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальностям 14.03.02 - патологическая анатомия, 03.03,04 - клеточная биология, цитология, гистология, является завершенной научно-квалификационной работой и содержит решение актуальной научной задачи – выявление особенностей патоморфоза и механизмов гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов, что имеет большое теоретическое и практическое значение для патологической анатомии, для клеточной биологии, цитологии, гистологии. По актуальности, научной новизне, уровню выполнения, научно-практической значимости полученных результатов работа полностью соответствует требованиям пунктов 9-13 «Положения о порядке присуждения учёных степеней», утверждённого постановлением Правительства РФ № 842 от 24.09.2013 г. (в редакции постановления Правительства Российской Федерации от 21 апреля 2016 г. № 335, от 28 августа 2017 г. № 1024; от 01 октября 2018 г. №1168), предъявляемым ВАК Министерства науки и высшего образования РФ к диссертациям на соискание ученой степени кандидата наук, а соискатель Наволокин Никита Александрович заслуживает присуждения ученой степени кандидата медицинских наук по специальностям 14.03.02 - патологическая анатомия, 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология.

Соискатель имеет более 150 опубликованных работ, в том числе по теме диссертации опубликовано 58 работ, из них в рецензируемых научных изданиях опубликовано 26 работ, входящих в Перечень рецензируемых научных изданий, получено 6 патентов на изобретение и подана 1 заявка на изобретение. Опубликована глава в зарубежной монографии издательства Elsiver. В работах дана характеристика особенностей патоморфоза и механизмов гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов. Диссертация не содержит недостоверных сведений об опубликованных соискателем ученой степени работах, в которых изложены основные научные результаты диссертации. Общий объем публикаций составляет 20,14 печатных листов. Авторский вклад соискателя составляет 85%.

Наиболее значительные работы:

1. Наволокин Н.А., Мудрак Д.А., Корчаков Н.В., Тычина С.А. Динамика роста перевиваемого рака почки у лабораторных крыс при длительном введении экстракта аврана лекарственного // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2014. – № 2. – С.213–214.
2. Наволокин Н.А., Мудрак Д.А., Тычина С.А., Корчаков Н.В. Изменения лейкоцитарной формулы, красного костного мозга и опухоли лабораторных крыс с перевитой саркомой–45 при введении экстрактов аврана лекарственного, бессмертника песчаного, кукурузы антациановой // Саратовский научно–медицинский журнал. – 2015. –T.11, № 3. – C. 328–332.
3. Наволокин Н.А., Маслякова Г.Н., Полуконова Н.В., Мудрак Д.А., Бучарская А.Б. Экспрессия маркеров апоптоза и аутофагии в перевитом раке почки у крыс при введении флавоноидсодержащего экстракта аврана лекарственного (GRATIOLA OFFICINALIS L.) // Архив патологии. - 2019. – Т.81. - №1.-С. 24-30.

На диссертацию и автореферат поступили отзывы: от главного научного сотрудника лаборатории иммунофенотипирования опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, д.м.н., профессора Златник Елены Юрьевны, зав. кафедрой патологической анатомии и судебной медицины ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, д.м.н., профессора Казачкова Евгения Леонидовича; зав. кафедрой патологической анатомии ФГБОУ ВО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздрава России, д.м.н., профессора Кирьянова Николая Александровича; зав. кафедрой нормальной анатомии, врача-патологоанатома патологоанатомического отделения ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, д.м.н., профессора Непомнящей Евгении Марковны; ведущего научного сотрудника Объединенного Института Ядерных Исследований (ОИЯИ), ЛЯП «Отдел фазотрона», Группа № 6 медицинских протонных пучков, д.б.н.  Восканян Каринэ Шаваршовны; главного научного сотрудника и руководителя НИИ молекулярной медицины и патобиохимии, зав. кафедрой биологической химии с курсом медицинской, фармацевтической и токсикологической химии, советника при ректорате – руководителя центра международных программ ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России, д.м.н., профессора Салминой Аллы Борисовной. Все отзывы положительные, подтверждают актуальность представленной работы, обоснованность полученных выводов, практическую и научно-теоретическую значимость результатов исследования. Критических замечаний в отзывах не содержится.

Выбор официальных оппонентов и ведущей организации обосновывается тем, что доктор медицинских наук, профессор Доросевич Александр Евдокимович является компетентным ученым в области патологической анатомии, а доктор медицинских наук, профессор Полякова Валентина Сергеевна - в области клеточной биологии, цитологии, гистологии, что подтверждается, в том числе публикациями близкими к тематике исследования соискателя в научных рецензируемых журналах. Выбор ведущей организации обосновывается тем, что ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России является широко известной своими достижениями организацией, сотрудники которой являются известными и признанными учеными в области патологической анатомии и клеточной биологии, цитологии, гистологии и способны определить научную и практическую ценность данной диссертации, что подтверждается публикациями в рецензируемых научных изданиях.

Диссертационный совет отмечает, что на основании внесенных соискателем исследований:

разработана и сформулирована научно-теоретическая концепция о значении аутофагии в развитии резистентности опухолевых клеток под действием флавоноидсодержащих экстрактов (аврана лекарственного, бессмертника песчаного, антоциановой формы кукурузы);

предложена оригинальная научная гипотеза, согласно которой применение иммуногистохимического маркера аутофагии LC3B при оценке патоморфоза опухоли позволяет выявить случаи с началом развития резистентности и провести адекватную оценку ответа опухоли на лечение; 

доказана активация апоптоза и блокирование аутофагии, пролиферации опухолевых клеток, а также снижение ангиогенеза под действием флавоноидсодержащих экстрактов, что открывает перспективность их использования для разработки противоопухолевых средств;

введены морфологические показатели оценки эффективности индуцированного патоморфоза в перевитых опухолях животных в эксперименте с учетом атрофических изменений, пролиферативной  активности, аутофагии и апоптоза.

Теоретическая значимость исследования обоснована тем, что:

доказано, что торможение пролиферации опухолевых клеток за счет их перехода в период покоя G0, блокирование цитопротекторной аутофагии  и одновременно активации механизмов апоптотической гибели объясняет противоопухолевое действие флавоноидсодержащих экстрактов, которое существенно отличается от известного ранее действия противоопухолевых средств, содержащих алкалоиды;

применительно к проблематике диссертации результативно использованы информативные  показатели  чувствительности опухолевых клеток к воздействию флавоноидсодержащих  экстрактов: активность роста клеток в культуре; примененный в работе комплексный подход с использованием широкого набора морфологических методов исследования позволил выявить особенности лечебного патоморфоза опухолей различного гистогенеза в экспериментах in vivo под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов;

изложены положения, характеризующие патоморфоз и механизмы гибели опухолевых клеток в культурах и перевитых опухолях под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов;

раскрыта сущность патоморфологических изменений опухолевых клеток животных и человека в экспериментах in vitro и in vivo под действием флавоноидсодержащих экстрактов, а также установлено, что критерием низкой чувствительности опухолей к воздействию флавоноидсодержащих экстрактов является появление в опухолевых клетках морфологических признаков аутофагии;

изучены качественные и количественные морфофункциональные изменения в опухолевых клетках животных и человека в экспериментах in vitro и in vivo под действием флавоноидсодержащих экстрактов;

проведена модернизация существующих методов оценки патоморфоза опухолевых клеток в экспериментах in vitro и in vivo.

Значение полученных соискателем результатов исследования для практики подтверждается тем, что:

разработаны и внедрены: способ определения минимальной эффективной концентрации противоопухолевого лекарственного средства, ингибирующего цитопротекторную аутофагию; тест «живые и мертвые» при одновременной окраске йодистым пропидием и акридиновым оранжевым (Патент №2693829 РФ); данные по патоморфологической диагностике структурных изменений опухолевых клеток животных и человека, которые внедрены в учебный процесс кафедры патологической анатомии и научную работу Центра коллективного пользования НИИ Фундаментальной и клинической уронефрологии ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского, в учебный процесс кафедры патологии животных СГАУ им. Н.И. Вавилова; в работу Международного научно-образовательном центре оптических технологий в промышленности и медицине «Фотоника» ФГБОУ ВО СГУ им. Н.Г. Чернышевского; в работу  Центра коллективного пользования ФГБУН ИБФРМ РАН.

определены показатели для объективной оценки развивающихся морфологических изменений в клетках опухолевых культур под действием растительных экстрактов, содержащих флавоноиды, такие как  показатель апоптотической константы (АC50), среднелетальная концентрация (LC50);

создана модель механизма противоопухолевого действия флавоноидсодержащих экстрактов с учетом действующих концентраций и развивающихся патоморфологических изменений;

представлены рекомендации по патоморфологической диагностике структурных изменений опухолевых клеток животных и человека, рекомендации по дальнейшему применению в экспериментальных  исследованиях и  клинической практике иммуногистохимического  маркера аутофагии LC3B для оценки морфологических признаков резистентности опухолевых клеток к противоопухолевой терапии,

Оценка достоверности результатов исследования выявила:

полученные автором результаты достоверны и воспроизводимы, получены на сертифицированном оборудовании;

теория исследования построена на проверяемых фактах и согласуется с современными представлениями и опубликованными данными по теме диссертации;

идея исследования базируется на критическом анализе обобщенных научных знаний по проблеме выявления морфологических признаков развития резистентности опухолевых клеток;

использовано сравнение авторских данных и данных, полученных ранее по рассматриваемой тематике в научной литературе;

установлено количественное и качественное совпадение отдельных авторских результатов с данными, представленными в независимых источниках по данной тематике;

использованы современные методики сбора и обработки исходной информации, статистического анализа, которые полностью соответствуют цели и задачам исследования.

Личный вклад соискателя состоит в: личном участие на всех этапах исследования: от постановки задач до обсуждения результатов. Автор самостоятельно проводил эксперименты in vitro и in vivo, а также производил аутопсийное исследование с последующей гистологической обработкой секционного материала; выполнял комплексный анализ полученных результатов гистологического, морфометрического и иммуногистохимического методов; осуществлял подбор и анализ наиболее подходящих цитологических характеристик клеток как в экспериментах in vitro, так и в ткани перевитых опухолей, внутренних органах, выполнял аналитический и статистический анализ полученных результатов; сформулировал научное обоснование и выводы. Автор принимал непосредственное участие в написании тезисов, научных статей и подготовке их к публикации в научных изданиях, участвовал в роли докладчика на различных отечественных и международных конференциях.

            Диссертация охватывает основные вопросы поставленной научной задачи и соответствует критерию внутреннего единства, что подтверждается последовательным планом исследования, концептуальностью и взаимосвязью выводов.

Диссертационный совет пришел к выводу о том, что диссертация Наволокина Н.А. представляет собой законченную научно-квалификационную работу, в которой содержится решение актуальной научной задачи – выявление особенности патоморфоза опухолей различного гистогенеза, установление возможных механизмов гибели и резистентности опухолевых клеток в экспериментах на клеточных культурах опухолей человека (in vitro) и перевитых опухолях у животных (in vivo) под влиянием флавоноидсодержащих экстрактов, что имеет существенное значение для патологической анатомии и клеточной биологии, цитологии, гистологии. По своей актуальности, научной новизне, уровню выполнения, теоретической и научно-практической значимости диссертация соответствует критериям, установленным п. 9 «Положения о порядке присуждения учёных степеней», утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24 сентября 2013 г. № 842 (в редакции постановления Правительства РФ № 335 от 21.04.2016 г., № 1024  от 28.08.2017 г. и № 1168 от 01.10.2018 г.), предъявляемым к диссертациям на соискание ученой степени кандидата наук.

На заседании 29 сентября 2020 года диссертационный совет принял решение присудить Наволокину Н.А. ученую степень кандидата медицинских наук.

При проведении открытого голосования диссертационный совет в количестве 19 человек, из них - 6 докторов наук по специальности 14.03.02 - патологическая анатомия и 6 докторов наук по специальности 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология, участвовавших в заседании, из 21 человека, входящих в состав совета, проголосовали: за - 19, против - 0, не участвовавших в голосовании – 0.

Председатель диссертационного совета Смирнов Алексей Владимирович
Ученый секретарь диссертационного совета Григорьева Наталья Владимировна

29.09.2020